CRISPR/Cas9基因敲除技术
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CRISPR/Cas9基因敲除技术
CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats），即成簇规律间隔的短回文重复序列，是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制，广泛存在于众多原核生物基因中，其中II型为CRISPR/Cas免疫系统，依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。
Cas9蛋白是一种能够降解DNA分子的核酸酶（nuclease），其中含有两个酶切活性位点，每一个位点负责切割DNA双螺旋中的一条链。CRISPR在大约40%的细菌和90%的古细菌（archaea）的基因组中均有存在，它依赖crRNA (CRISPR RNA能够与tracrRNA配对，形成双链RNA结构，这种双链RNA分子能够介导Cas9核酸内切酶对与双链RNA分子互补结合的DNA序列进行切割) 和tracrRNA (trans-activating chimeric RNA, 即反式激活嵌合RNA，一种非编码RNA，能够促进 crRNA的形成，是Cas9蛋白发挥RNA介导的DNA切割作用必不可少的辅助因子)对外源DNA进行特异的识别，然后使用Cas9对外源DNA进行序列特异性地切割降解，从在细菌和古细菌细胞发挥了一种获得性免疫的作用。
CRISPR系统间区序列的多样性和特异性已被广泛应用于基因分型、流行病学研究、分析不同人体内的细菌菌群差异、检测环境中的噬菌体等科学研究。利用CRISPR系统作用机制的独特性用于构建噬菌体抗性的工业生产菌株。CRISPR系统还可能广泛应用于：作为遗传操作的工具，用于靶向基因沉默；rRNA-Cascade复合物可用于体外DNA、RNA分子的位点特异性切割；在临床上，通过限制质粒结合转移而控制药物抗性基因在致病菌之间扩散等。最近有多项研均表明，RNA介导的Cas9系统可以被用于对人类和小鼠细胞，以及细菌或斑马鱼胚胎进行基因组改造的工作当中( Martin et al. Science.2012；Mali P，Science.2013；Cong L，Science.2013)。
与其它基因组工程技术比较，CRISPR/Cas9技术拥有以下技术优势：
(1) 无物种限制，靶向精确性更高，可实现对靶基因多个位点同时敲除；
(2) 使用更方便，费用更低:Cas蛋白不具特异性，只需合成一个sgRNA就能实现对基因的特异性修饰。
(3) CRISPR/Cas9系统可避免超长、高度重复的TALENs编码载体带来的并发症。
安布瑞生物目前拥有利用TALEN和CRISPR/Cas9技术完成细菌基因的敲除/敲入、细胞基因的敲除/敲入、动物个体（大小鼠、猪等模式动物）的基因敲除/敲入等先进技术手段，曾为全国各科研院所及中科院系统提供CRISPR/Cas9技术相关服务，完成40余例动物个体基因敲除。安布瑞生物战略合作平台——美国国立卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)，团队成员曾于Nature等国际**科研杂志发表大量CRISPR/Cas9相关研究成果。安布瑞生物始终紧跟相关领域前沿技术，立志为国内所有科研人员提供***的技术服务以及产业化合作。