流式细胞仪进行细胞周期检测
一、细胞周期的定义
生命是从一代向下一代传递的连续过程,因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成,或是细胞的自身死亡。通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。在这一过程中,细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。
二、PI染色的检测
PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。
三、PI单染色的固定方法
1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。
2.3ml PBS洗一次。
3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。
4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。
5.400目的筛网过滤1次,500~1000r/min离心5min,弃去PBS。
6.用1ml PI染液,4℃避光30min。
7.流式细胞仪检测:PI用氩离子激发荧光,激发光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光,可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。
四、服务周期
20个工作日